多彩な充填剤 Chromatographic media for Micro Preparation Tool

NuTip(TM)、TopTip(TM)、Lab-In-Plate(TM) 等の Glygen 社製微量精製ツールには、極めて多彩なアプリケーションに対応する各種充填剤をご用意しております。 微量分析前処理用として、タンパク・抗体・DNA からリン酸化ペプチドや糖タンパク、固定化酵素による酵素処理等、広範なアプリケーションに適応します。

  • Silica / C18 / C8 / C4 / CN / NH2:一般逆相・順相モード
  • Carbon (Graphite) / C18 + Carbon (Graphite):疎水性・親水性サンプル両用
  • POROS R1 / POROS R2 / POROS R3:ポリマーベース POROS
  • POROS WAX / POROS SAX / POROS SCX: ポリマーベース POSOS イオン交換モード
  • G-10 / G-25 / G-50 / G-100:GPCゲルFine
  • P-2 / P-4 / P-6:特に炭水化物の精製GPC ゲル
  • Cellulose:糖鎖解析でヒドラジン分解物、酵素反応物などのサンプルを処理することにより糖鎖以外の夾雑物を除去
  • ZrO2 / ZrO2 + Graphite / ZrO2 + POROS / ZrO2 + POROS + Carbon:リン酸化ペプチド、糖ペプチド用
  • TiO2 / TiO2 + Graphite / TiO2 + POROS / TiO2 + POROS + Carbon:リン酸化ペプチド、糖ペプチド用
  • TiO2 + ZrO2:リン酸化ペプチド・非リン酸化ペプチド両用
  • HILIC:親水性クロマトグラフィーモード
  • PolyHYDROXYETHYL A:親水性クロマトグラフィー(HILIC)モード
  • Anion Exchanger:弱アニオン交換モード
  • Cation Exchanger:弱カチオン交換モード
  • Anion Exchanger Strong:強カチオン交換モード
  • SDS-Removal:SDS 除去用
  • IMAC※:Ni / Fe / Ga / Ca→リン酸化ペプチドの濃縮に使用
  • ProteinA / G:モノクローナル抗体の精製に使用
  • Lectin:糖ペプチドの濃縮に使用
  • Borate(Phenylboronic Acid):リボース、RNA などの精製に使用
  • Blue dye:アルブミン除去に使用
  • Red dye(Porcin red dye):Nucleotide dependent 酵素、リポ蛋白質、プラスミノーゲンの精製に使用
  • Trypsin:アガロースベース固定化酵素
  • Trypsin(Porozyme):ポリマーベース固定化酵素
  • Sialidase:シアリダーゼ
※:IMAC-Ni / Fe / Ga / Ca では、NuTip / SyringeTip は Silica ベース、 TopTip は POROS ベースです。

タンパク・ペプチドの微量精製・脱塩

タンパク・ペプチドの微量精製および脱塩用充填剤として、疎水性の高いサンプル向けに C18、C8、C4、疎水性・親水性サンプル両用として Carbon(Graphite)、親水性サンプル向けに HILIC の合計5タイプの充填剤をお奨めしています。

- Selected references -

• CAR, C18: A Alpert and A Shukla. Displacement Chromatography Effects Can Cause Highly Selective Sampling of Peptides During Solid Phase Extraction Cleanup. ABRF 2004 Poster.
• CAR: Susan Grass, Cheryl F. Lichti, R. Reid Townsend, Julia Gross, and Joseph W. St. Geme, III The Haemophilus influenzae HMW1C Protein Is a Glycosyltransferase That Transfers Hexose Residues to Asparagine Sites in the HMW1 Adhesin PLoS Pathog. 2010 May; 6(5): e1000919.
• C18: Hideaki Shimizu et al. Crystal structure of an active form of BACE1, an enzyme responsible for Amyloid Protein production. Molecular and Cellular Biology, Vol. 28:11 (2008), p. 3663-3671.
• C18: Tariq Mahmood et al. Proteomic analysis of bacterial-blight defense-responsive proteins in rice leaf blades. Proteomics, Vol. 6, Issue 22 (2006), p. 6053-5.
• C18: Hao Wang, et al. PKC-[beta]II sensitizes cardiac myofilaments to Ca2+ by phosphorylating troponin I on threonine-144. Journal of Molecular and Cellular Cardiology,Volume 41, Issue 5 (2006), p. 823-833.
• CAR: Michael Wacker, et al. Substrate specificity of bacterial oligosaccharyltransferase suggests a common transfer mechanism for the bacterial and eukaryotic systems. PNAS, Volume 103, No. 18 (2006) p. 7088-7093
• HIL: Wim Fremout, et al. Tryptic peptide analysis of protein binders in works of art by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Analytica Chimica Acta, Volume 658, Issue 2 (2010), p. 156-162.

タンパク・ペプチドの濃縮

タンパク・ペプチドの微量濃縮用として、疎水性の高いサンプル向けに C18 ・ C8 ・ C4、疎水性・親水性サンプル両用として Carbon(Graphite) ・ Carbon(Graphite)+C18、親水性サンプル向けに HILIC 、酸性サンプル向けに Silica SAX ・ Silica WAX、塩基性サンプル向けに Silica SCX ・ Silica WCX の合計 10 タイプの充填剤をラインナップしています。

- Selected references -

• C18: A Cvetkovic, et al. Microbial metalloproteomes are largely uncharacterized. Nature 466 (2010), p. 779-782.
• C18: N Ahsan, et al. Ozone stress-induced proteomic changes in leaf total soluble and chloroplast proteins of soybean reveal that carbon allocation is involved in adaptation in the early developmental stage. PROTEOMICS, Vol. 10, Issue 14 (2010) p. 2605–2619.

リン酸化タンパクの濃縮

質量分析の前処理のためのリン酸化ペプチドの濃縮に関して、ZrO2 や TiO2 を用いた金属酸化物アフィニティークロマトグラフィー (Metal Oxide Affinity Chromatography -MOAC) が旧来の IMAC に比べてより良好な結果を示したという結果が最近報告されています。 Glygen 社ではこれらの担体を充填したチップを用意しました。 充填剤のタイプは多重リン酸化ペプチドに選択性を示す TiO2、一リン酸化ペプチドに選択性を示す ZrO2、広範な選択性を示す TiO2/ZrO2 のミックス、NuTip(TM) では上記3種を 32本ずつ混合したキットもご用意しています。ポリマーベースの POROS 逆相担体とこれら ZrO2、TiO2 のミックスモードは、リン酸化ペプチドと非リン酸化ペプチドの両方の精製用として準備されています。

- Selected references -

“Both MALDI and ESI-MS analyses of [Glygen’s] TiO2 NuTip eluents resulted in the reproducible observation of a greater number of unique sites of phosphorylation with the least amount of nonspecific binding compared with the other MOAC resins. …Enrichment procedures…dramatically improve detection & sequencing of phosphopeptides…” (Gates, et al)

• Gates, et al [NIH]. ‘Comparison of metal and metal oxide media for phosphopeptide enrichment prior to mass spectrometric analyses.’ JASMS June 2010.
• Mikkat S, et al. MS characterization of qualitative protein polymorphisms in the spinal cords of inbred mouse strains. Proteomics. 2010 Mar;10(5):1050-62.
•Highly selective enrichment of phosphorylated peptides from peptide mixtures using titanium dioxide microcolumns.Martin R. Larsen, Tine E. Thingholm, Ole N. Jensen, Peter Roepstorff, and Thomas J. D. Jorgensen, Molecular & Cellular Proteomics 4:873-886, 2005. (Glygen products work with same method.)
•Characterization of Phosphopeptides from Electron Detachment Dissociation FTICR Mass Spectrometry: H.K. Kweon & K. Hakansson: ASMS'05Poster no. WP422. (Works same or better than TiO2 and IMAC)
• Rudrabhatla, et al. ‘Quantitative phosphoproteomic analysis of neuronal intermediate filament proteins (NF-M/H) in Alzheimer’s disease by iTRAQ.’ FASEB Journal. 2010 Nov; 24(11): 4396-4407.
• Özlü, Nurhan et al. Binding Partner Switching on Microtubules and Aurora-B in the Mitosis to Cytokinesis Transition. Mol Cell Proteomics, 2010 9: 336-350.
• Brian Roberts, et al: A fluorimetric method for determination of calcineurin activity. Cell Calcium, Volume 43, Issue 5, May 2008, Pages 515-519.

界面活性剤の除去

試料溶液中の界面活性剤の存在は、以降のアッセイや測定に支障を来すケースが多く事前に除去する必要があります。 SDS を選択的に除去可能な SDS Removal media と、広範に利用可能な HILIC の2種タイプの充填剤をご用意しています。

抗体の濃縮

抗体濃縮用の NuTip(TM) は、Protein A を Glygen 社のパテンテッドテクノロジーにより充填剤に固定化したものです。 最大化された表面積を持つ充填剤の効果により高効率で抗体の濃縮を行えます。
TopTip(TM)、PlateTip(TM) では、Protein G を固定化したラインナップもございます。

- Selected references -

• E. Lundberg, et al. A novel method for reproducible fluorescent labeling of small amounts of antibodies on solid phase. J Immunological Methods, Issues 1-2, April 2007, p. 40-49.

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